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環(huán)己胺丙磺酸CAPS是一種常用的生化原料，可以用作助焊劑、干燥劑、涂料中水性異氰酸酯的固化劑，在生化行業(yè)，通常作為生物緩沖劑。根據(jù)其純度和雜質(zhì)含量的不同，應(yīng)用的行業(yè)也不相同。
從分子結(jié)構(gòu)上看，CAPS是一種環(huán)己烷N-取代的氨基磺酸，分子量221.32，具有兩性，是一種非常好的生物緩沖劑，pH緩沖范圍9.7-11.1，通常被用作WB實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)PVDF轉(zhuǎn)膜或硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)膜的緩沖液，
WB即western blot 蛋白質(zhì)免疫印記實(shí)驗(yàn)，原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物樣品進(jìn)行著色，通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)如下：
CAPS試劑
1. SDS-PAGE電泳：與核酸雜交方法類似，只不過(guò)被檢測(cè)的是蛋白質(zhì)，探針是抗體，顯色用標(biāo)記的二抗。一般來(lái)說(shuō)低分子量蛋白用Tri-Glycerine或者Tris-Tricine緩沖體系，高分子量蛋白則用CAPS緩沖系統(tǒng)更好。緩沖液中的甘氨酸會(huì)影響測(cè)序，所以現(xiàn)在測(cè)序用的轉(zhuǎn)膜緩沖液是10mM/1CAPS10%甲醇。CAPS電印記緩沖液中的甲醇濃度范圍是0~20%，一般甲醇濃度高的緩沖液對(duì)低分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效果好，而甲醇濃度低甚至不含甲醇的緩沖液則有利于高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。
2. PVDF膜處理時(shí)先放入甲醇浸泡幾秒鐘，再放入CAPS電印記緩沖液，后續(xù)操作須防止膜干涸，如果PVDF膜變干，需要重復(fù)前面步驟。電泳凝膠也需要在CAPS緩沖液中浸泡5-10分鐘，有些強(qiáng)堿性蛋白可不用此步驟。
3. 轉(zhuǎn)印條件通常是50V恒壓、100-170mA電流強(qiáng)度，室溫下進(jìn)行電印記轉(zhuǎn)移，凝膠和PVDF膜之間的氣泡務(wù)必除盡，分子量較高的蛋白注意延長(zhǎng)轉(zhuǎn)移時(shí)間。
4. PVDF膜染色前需取出用去離子水稍微漂洗，用甲醇浸泡，然后用0.1%考馬斯亮藍(lán)染色30-50秒，50%甲醇脫色，去離子水洗滌并晾干即可。
以上介紹了蛋白質(zhì)印記實(shí)驗(yàn)需要注意的一些事項(xiàng)，除實(shí)驗(yàn)本身外，德晟科技提醒您，為了安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作，CAPS電印記緩沖液建議選德晟生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)環(huán)己胺丙磺酸配置。
